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嗜酸粒細(xì)胞親合素N端突變體重組腺病毒在小鼠變應(yīng)性鼻炎中的作用

【?2006-06-29 發(fā)布?】 臨床報(bào)道  

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    (重慶)為了獲取人嗜酸粒細(xì)胞親合素(Eotaxin)N端突變體(Met/Eotaxin)重組腺病毒,探討其在小鼠變應(yīng)性鼻炎中的作用。研究者從人外周血單個(gè)核細(xì)胞總RNA中克隆人400 bp的Eotaxin基因,通過N端點(diǎn)突變獲取Met/Eotaxin基因,構(gòu)建pAdtrack-CMV-Met/Eotaxin腺病毒穿梭質(zhì)粒;將該質(zhì)粒在大腸桿菌BJ5183中與腺病毒基因組質(zhì)粒進(jìn)行同源重組;將Met/Eotaxin重組腺病毒載體在AD293細(xì)胞中包裝、擴(kuò)增獲取Met/Eotaxin重組腺病毒(Ad-Met/Eotaxin);采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR)和蛋白印跡雜交(Western blot)對(duì)Met/Eotaxin重組腺病毒的正確性進(jìn)行鑒定。采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏和激發(fā)誘導(dǎo)小鼠變應(yīng)性鼻炎,40只小鼠隨機(jī)分為變應(yīng)性鼻炎組和Ad-Met/Eotaxin組。Ad-Met/Eotaxin組在每次激發(fā)前30 min予以每只小鼠2 ml滴度為5×109 pfu/ml的Ad-Met/Eotaxin腹腔注射。比較二組動(dòng)物變應(yīng)性鼻炎癥狀和鼻黏膜形態(tài)學(xué)改變,并在熒光顯微鏡下觀察腺病毒轉(zhuǎn)染效率標(biāo)志物--綠色熒光蛋白在鼻黏膜等組織中的表達(dá)。結(jié)果PCR和Western blot結(jié)果顯示Ad-Met/Eotaxin構(gòu)建正確;Ad-Met/Eotaxin腹腔注射后可高效轉(zhuǎn)染小鼠鼻黏膜;Ad-Met/Eotaxin可顯著減輕小鼠變應(yīng)性鼻炎癥狀以及鼻黏膜形態(tài)學(xué)改變。可見 Ad-Met/Eotaxin具有阻斷小鼠變應(yīng)性鼻炎的作用。/**/
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