（蘇州）為了在大腸埃希菌中高效表達(dá)及純化弓形蟲GRA6抗原，為制作弓形蟲感染基因工程診斷試劑盒奠定基礎(chǔ)。研究者將重組pGEX-GRA6表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株，在異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)下表達(dá)。超聲破壁后，通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)形式，并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物以硫酸銨沉淀、Sephedax G50脫鹽和GST親和層析柱進(jìn)行目的蛋白的純化。通過Western blotting檢測其純化的重組抗原的免疫反應(yīng)性。結(jié)果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大腸埃希菌中得到了高效表達(dá)。對(duì)表達(dá)產(chǎn)物可溶性分析表明，表達(dá)蛋白在上清液中和包涵體中均有表達(dá)。在上清液中表達(dá)的可溶性蛋白經(jīng)純化后蛋白純度可達(dá)90%以上.Western blotting分析表明純化蛋白能被弓形蟲感染的人血清所識(shí)別。可見GRA6在大腸埃希菌中得到了高效表達(dá)，重組抗原經(jīng)純化后能特異性地被弓形蟲感染者血清所識(shí)別。
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