第四軍醫(yī)大學(xué)流行病學(xué)教研室主任閆永平教授等應(yīng)用分子生物學(xué)克隆技術(shù)，在國內(nèi)首次成功構(gòu)建體外HBV全基因克隆質(zhì)粒pcDNA3-3HBV細(xì)胞系。據(jù)介紹，由于乙肝病毒（HBV）宿主范圍窄，動物模型缺乏，迄今用于繁殖HBV的所有組織培養(yǎng)系統(tǒng)，都是用串聯(lián)的HBV基因組，因而制約了對HBV的深入研究。將HBVDNA轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞，建立表達(dá)HBV的體外培養(yǎng)細(xì)胞模型，是當(dāng)前研究HBV生物學(xué)特性及其發(fā)病機(jī)制的一種新思路。對此，閆永平等研究人員采用克隆技術(shù)，將以3倍HBV基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒，通過體外培養(yǎng)分離、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、抗原表達(dá)及檢測鑒定等一系列技術(shù)處理后，從而成功地克隆出一種全新的HBV全基因組克隆轉(zhuǎn)染細(xì)胞系“pcDNA3-3HBV”。

    該細(xì)胞系檢測結(jié)果顯示，4周“pcDNA3-3HBV”即穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（HepG2）靶細(xì)胞，陽性克隆形成；培養(yǎng)上清HBsAg及HBeAg呈陽性，細(xì)胞內(nèi)HBcAg呈核漿型分布；擴(kuò)增可見HBVS基因mR鄄NA表達(dá)；上清中HBV特異性前S/S基因陽性，HBV滴度48小時(shí)為1×108拷貝/升。提示構(gòu)建的HBV全基因細(xì)胞系在轉(zhuǎn)錄、復(fù)制及特異性表達(dá)方面良好，能產(chǎn)生較高水平的HBV。

    研究人員認(rèn)為，HBV基因組呈雙鏈閉合環(huán)狀，基因結(jié)構(gòu)緊湊，其開放讀框分布于全長DNA。用其構(gòu)建的“pcDNA3-3HBV”含有完整的頭尾串聯(lián)的HBV全基因，載體pcD-NA3帶有CMV早期啟動增強(qiáng)子，轉(zhuǎn)染細(xì)胞可分泌結(jié)構(gòu)完整的病毒顆粒。同時(shí)，其優(yōu)點(diǎn)還在于病毒復(fù)制可持續(xù)時(shí)間長，且能傳代培養(yǎng)。目前在該領(lǐng)域水平上，國外僅利用轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)上清感染細(xì)胞研究HBV的感染機(jī)制，而我國已利用陽性血清成功感染Hep×G2細(xì)胞和原代培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞，并將其分泌的HBV建成接近自然狀態(tài)。這個(gè)HBV全基因克隆細(xì)胞系，為我國HBV感染機(jī)制及胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞特異性受體的后續(xù)研究奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)并帶來廣闊的應(yīng)用前景。