（武漢）為了研究旨在構建重組起搏基因質粒pIRES2-EGFP-HCN2，并檢測其在體外心房肌細胞及犬病態竇房結綜合征(病竇)模型體內的表達。研究者對含mHCN2 cDNA 的PTR 載體進行轉化和擴增，將所得mHCN2 基因定向克隆到真核表達載體pIRES2-EGFP中，進行雙酶切來鑒定克隆的正確性。將重組質粒用電穿孔法轉染心房肌細胞，同時直接注射至犬病竇模型的竇房結區域，體表心電圖監測犬竇房結功能改善情況，并通過熒光顯微鏡及RT-PCR檢測重組質粒pIRES2-EGFP-HCN2在體內外的表達。而對照組僅注射生理鹽水。結果 構建了重組質粒pIRES2-EGFP-HCN2。熒光顯微鏡下可見轉染后的心房肌細胞呈綠色熒光，其搏動頻率較未轉染的細胞明顯增快[(180±11)次/min 與 (140±14)次/ min，P＜0.05]。注射組織的冰凍切片顯示綠色熒光蛋白，RT-PCR顯示了mHCN2基因片段，體表心電圖顯示犬竇房結功能改善[(150±13)次/ min 與(105±17)次/ min，P＜0.05]。而對照組始終未見到綠色熒光蛋白表達及竇房結功能改善。可見 成功構建了重組質粒pIRES2-EGFP-HCN2，并在體外心房肌細胞及犬病竇模型體內成功表達，為生物起搏的研究奠定基礎。/**/