6月16日消息，中國研究者分析了HIV Tat融合后對融合蛋白生物學(xué)活性的影響，探討HIV Tat的生物細(xì)胞膜穿透功能和意義。

研究者以胸腺激酶（TK）基因?yàn)閳?bào)告基因，將不同長度的甘氨酸（Gly）密碼子融合在HIV Tat與TK基因之間以及兩種基因倒置融合，分別克隆至PBK原核表達(dá)載體，大腸埃希菌表達(dá)，異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)，超聲波破碎后，經(jīng)耦聯(lián)Tat蛋白單克隆抗體的層析柱層析收集。融合蛋白與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)，24h后間接免疫熒光檢測。加用更昔洛韋，3d后錐蟲藍(lán)染色計(jì)算細(xì)胞死亡率，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率。

結(jié)果克隆出含有不同甘氨酸密碼子的HIVTat—Gly（n）-TK（n=0，2，4，6）融合基因，成功表達(dá)Tat—TK系列融合蛋白和TK—Tat融合蛋白。間接免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)Tat—TK系列融合蛋白與Tat蛋白、TK—Tat融合蛋白透過膜效率相似；但流式細(xì)胞儀檢測表明，在培養(yǎng)基含有更昔洛韋的條件下，Tat—Gly（4）一TK、Tat—Gly（6）一TK、Tat—Gly（2）-TK、Tat—TK融合蛋白、HIVTat組和TK—Tat致HepG2細(xì)胞凋亡率分別為14．77％、4．30％、12．69％、3．OO％、1．03％和4．40％。錐蟲藍(lán)染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞死亡率也有類似結(jié)果，分別為80．2％、56．7％、65．4％、58．4％、9．1％和57．1％，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0．05），但TK—Tat和Tat—TK融合蛋白組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．24）。

由此，研究者得出結(jié)論，Tat與TK基因之間融合甘氨酸密碼子的數(shù)目對融合蛋白中Tat的細(xì)胞融合穿透功能不產(chǎn)生影響，而對TK的體外細(xì)胞致死作用有較大影響，其中間隔4個(gè)甘氨酸密碼子對融合蛋白TK體外細(xì)胞致死作用的影響最小，同時(shí)TK基因與HIVTat的倒置融合不影響兩者生物學(xué)功能。