5月12日消息，中國(guó)研究者觀察了小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12（caspase-12）基因特異性小干擾RNA（siRNA）構(gòu)建的表達(dá)載體pRNAT-casp12對(duì)caspase-12基因的抑制及其對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞凋亡的影響。

研究者以小鼠肝細(xì)胞株Hepa1-6為靶細(xì)胞，利用脂質(zhì)體與重組質(zhì)粒pRNAT-casp-2共轉(zhuǎn)染，分別在轉(zhuǎn)染24、48和72h后收集細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析和Western印跡檢測(cè)caspase-12的表達(dá)；利用毒胡蘿b素（TG）誘導(dǎo)細(xì)胞，建立內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡模型，通過(guò)DNA梯帶凝膠電泳檢測(cè)，選出適合的誘導(dǎo)時(shí)間；TG誘導(dǎo)已轉(zhuǎn)染了pRNAT—casp12的干擾組細(xì)胞后，以空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組為對(duì)照，利用Western印跡檢測(cè)caspase-12蛋白表達(dá)水平的變化，通過(guò)DNA梯帶凝膠電泳、流式細(xì)胞儀、Hoechst33258染色等方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，觀察caspase-12siRNA對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)pRNAT—casp12轉(zhuǎn)染細(xì)胞24、48和72h后，caspase-12mRNA的水平分別下降了45．6％、72．5％和59．5％；caspase-12蛋白表達(dá)下降了17．1％、37．3％和60．1％；2μmol／L TG處理細(xì)胞30h后，成功誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；與對(duì)照組相比，干擾組細(xì)胞經(jīng)TG誘導(dǎo)后，caspase-12蛋白表達(dá)水平下降了54．6％，流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)早期調(diào)亡率下調(diào)了51．4％（P〈0．01）。

由此，研究者得出結(jié)論，小鼠caspase-12siRNA對(duì)Hepa1—6細(xì)胞caspase-12基因的表達(dá)具有顯著的抑制作用，能夠明顯阻抑內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡，有望發(fā)展成為新一代抗凋亡藥物。