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乙型肝炎病毒前S1結合蛋白的篩選和鑒定

【?2007-09-27 發(fā)布?】 臨床報道  

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    酵母雙雜合體系證實MEK1可能是一個前S1結合蛋白。 乙型肝炎是由乙肝病毒引起的一種病毒性肝炎,常常以腹脹、納差、大便稀或干結等消化道癥狀為主要特征。

    中華傳染病雜志一月第一期刊登一項研究,研究者利用PCR擴增HBV前S1基因序列,根據(jù)酵母雙雜合體系構建餌質粒pAS2-1-preS1,并測定序列;餌質粒轉化入酵母菌AH109,Western印跡法證實前S1-BD融合蛋白在酵母細胞中的正確表達。pAS2―1-preS1及正常成人肝細胞cDNA文庫共轉化酵母細胞,通過選擇性培養(yǎng)及β-半乳糖苷酶活性測定篩選陽性菌落,分離實驗排除假陽性克隆,擴增陽性克隆的目的基因并測定序列,查詢其同源序列,行交合實驗進一步證實目的蛋白同前S1蛋白在酵母細胞中能否特異性結合。 福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院消化科李丹等研究人員研究顯示,成功構建pAS2-1-preS1餌質粒,Western印跡法證實轉化餌質粒的酵母細胞能正確表達前S1-BD融合蛋白,pAS2―1-preS1及正常成人肝細胞cDNA文庫共轉化酵母細胞后,選擇性培養(yǎng)出101個菌落,經β-半乳糖苷酶活性測定及分離實驗后篩選出1個陽性克隆,其cDNA插入片段與絲裂原活化蛋白激酶-胞外信號調節(jié)蛋白激酶(MAPK―ERK)激酶1(MEK1)基因高度同源。交合實驗證實MEK1同前S1蛋白在酵母細胞中可特異性結合。 因此可見酵母雙雜合體系證實MEK1可能是一個前S1結合蛋白。

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